酒中氨基甲酸乙酯的测定

方法一、GC-MS 法 参照GB 5009.223-2014

摘要：本文参照食品安全国家标准方法《GB 5009.223-2003 食品中氨基甲酸乙酯的测定》 ，进行了白酒中氨基甲酸乙酯含量的测定。采用商品化Cleanert EC氨基甲酸乙酯专用固相萃取柱（碱性硅藻土）进行样品前处理，GC-MS法测定，结果表明氨基甲酸乙酯检出限为2.0μg/kg，定量限为5.0 μg / kg（取样2.00g），回收率在98.3%～104.5%；白酒样品的日间精密度测试，RSD<3%。方法简单，产品稳定，结果准确灵敏，完全满足分析检测的要求。

氨基甲酸乙酯(Ethyl Carbamate, EC)，是一种致癌物，可以引起肺肿瘤、淋巴癌、肝癌、皮肤癌等。它是发酵食物和酒精饮品在发酵或贮存过程中天然产生的污染物。2007年，世界卫生组织的国际癌症研究机构( IARC) 正式将氨基甲酸乙酯( Ethyl Carbamate) 归为2A类致癌物。因此对相关食品中进行氨基甲酸乙酯的检测和监测是非常必要的。

 

一、试剂和材料

标准溶液配制

1.0 mg/mL D5-氨基甲酸乙酯贮备液：准确称取10.0 mg D5-氨基甲酸乙酯标准品，用甲醇定容至10 mL。

2.0 μg/mL D5-氨基甲酸乙酯使用液：准确吸取1.0 mg/mL D5-氨基甲酸乙酯标准贮备液0.1 mL，用甲醇定容至50 mL。

1.0 mg/mL氨基甲酸乙酯贮备液：准确称取0.5000 g氨基甲酸乙酯标准品，用甲醇定容至50 mL。

分别准确吸取一定量氨基甲酸乙酯标准，加100 μL  2.0 μg/mL的D5-氨基甲酸乙酯溶液，用甲醇定容至1.0 mL，得到10.0、25.0、50.0、100.0、200.0、400.0、1000.0 ng/mL的标准使用液（内含200.0 ng/mL D5-氨基甲酸乙酯）

固相萃取柱：Cleanert JP氨基甲酸乙酯专用固相萃取柱（碱性硅藻土）

气相色谱柱：DA-INNOWAX柱

 

二、实验方法

样品前处理

准确量取 2.00 ml 酒样（注：啤酒样品EC含量较低，取4 mL样品上样），加 100 μL  2.0 μg/ mL D5-氨基甲酸乙酯内标使用液、氯化钠 0.3 g（白酒、酱油不加），超声溶解、混匀，然后加样到氨基甲酸乙酯上，抽真空，让试样慢慢渗入到Cleanert JP氨基甲酸乙酯专用固相萃取柱中，静置约 10 min，先用10 mL 正己烷淋洗除杂，然后用 15 mL 5%乙酸乙酯/乙醚溶液以1 mL/min 流速洗脱并收集于10 mL 具塞刻度试管中，在室温下用氮气缓缓吹至0.5mL 左右，用甲醇定容至1.0 mL 制成测定液供GC/MS分析，同时做空白。

GC-MS条件

色谱柱：DA-INNOWAX柱，30 m*0.25 mm*0.25 μm；

进样口温度：220℃；柱温：初温 50℃，保持 1 min，然后以 8℃ / min 升至 180，然后以 15℃/ min 升至 210℃ 保持5 min；

载气：氦气，纯度≥99.999％

流速：1 mL/min；

电离方式：EI源。

离子源温度：230℃；

进样方式：不分流进样；

样量：1-2μL；

氨基甲酸乙酯选择监测离子（m/z）： 62、76、89；定量离子62；

D5-氨基甲酸乙酯选择监测离子（m/z）64、76；定量离子64

 

三、实验结果

色谱图

 

图1 氨基甲酸乙酯及内标总离子图

 

图2 氨基甲酸乙酯质谱图

 

 

3 内标 D5-氨基甲酸乙酯质谱图

标准曲线

 

 

酒样加标的回收率及精密度

表1 白酒样品加标的回收率及精密度

 

序号	白酒样品 （mg/L）	加标量（mg/L）	测定浓度（mg/L）	回收量（mg/L）	回收率（%）	平均回收率 (%)	RSD %
1	73.86	100	178.32	104.46	104.5	101.4	2.51
2		100	176.78	102.92	102.9
3		100	175.64	101.78	101.8
4		100	173.25	99.39	99.4
5		100	172.20	98.34	98.3

表2 白酒样品日间精密度

 

测定数据（mg/L）							平均值	RSD%
60.47	60.79	59.05	63.04	58.15	56.61	59.03	59.13	2.94
58.99	59.75	60.24	57.49	59.77	56.91	57.60

注：相同的样品，，每天测定2次，连续7天内测定数据

 

 

方法检出限

当试样取2.00g时，本方法氨基甲酸乙酯检出限为2.0μg/kg，定量限为5.0μg/kg。

 

四、结论

本文采用商品化Cleanert EC氨基甲酸乙酯专用固相柱（碱性硅藻土）前处理结合DA-INNOWAX柱进行白酒中氨基甲酸乙酯的测定，结果表明氨基甲酸乙酯检出限为2.0 μg/kg，回收率在98.3% ～104.5%，完全满足食品安全国家标准GB5009.223-2014方法的检测要求。

 

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